扩增潜伏HIV-1 DNA序列实验方法的优化

作者：王鹏飞; 焦艳梅; 朱焕章; 吴昊

来源：北京医学, 2010, (12): 972-974.

DOI：10.15932/j.0253-9713.2010.12.012

• 潜伏HIV-1 DNA
• 巢式PCR
• CD4 T细胞
• 外周血单个核细胞 Latent HIV-1 DNA Nested PCR CD4 T lymphocytes PBMC

目的对PCR扩增潜伏HIV-1DNA序列的实验方法进行优化。方法收集30例经高效抗逆转录病毒治疗(HAART)6~12个月的HIV-1感染者抗凝血标本,分别从外周血单个核细胞(PBMC)和高度纯化的CD4+T细胞提取基因组DNA,巢式PCR扩增HIV-1env的C2-V5区,电泳检测扩增产物并进行DNA序列测定。结果同一患者PBMC纯化CD4+T细胞标本扩增HIV-1env基因C2-V5区的效率(93.3%)明显高于直接从PBMC标本扩增该目的片段的效率(10.0%)。结论 PBMC纯化CD4+T细胞后,再提取基因组DNA进行巢式PCR扩增,可提高扩增潜伏HIV-1DNA序列的效率。

• 单位
  首都医科大学附属北京佑安医院; 遗传工程国家重点实验室; 生命科学学院; 复旦大学