HNE诱导下PKCδ/θ-Duox1-ROS对气道黏液高分泌影响的体外实验研究

作者：何明欣; 杨雅楼; 徐立; 杨雨菡; 张紫薇; 李琪^*; 周向东^*

来源：中国免疫学杂志, 2023, 1-10.

• 蛋白激酶Cδ/θ
• 双重功能氧化酶1
• 活性氧
• 黏蛋白5AC

目的 探讨蛋白激酶C (PKC) δ/θ-双重功能氧化酶1 (Duox1) -活性氧 (ROS) 信号通路对人气道黏液 (MUC) 5AC的调控机制及作用，以期为气道黏液高分泌的治疗手段提供新的靶点。方法 分别给予PKC及其亚基PKCδ/θ抑制剂、Duox1抑制剂或自由基清除剂DMTU对人气道上皮细胞 (16HBE) 进行预处理，再给予人中性粒细胞弹性蛋白酶 (HNE) 刺激建立体外气道炎症细胞模型。采用试剂盒测定各组细胞中ROS的生成水平，实时荧光定量PCR检测Duox1和MUC5AC的mRNA水平，Western blotting测定各组细胞干扰因素对Duox1蛋白水平的影响，ELISA和免疫荧光检测MUC5AC在各组细胞中的蛋白表达情况。结果 与对照组相较，HNE组的ROS生成明显增多，Duox1及MUC5AC mRNA和蛋白表达也增加 (P<0.05)；给予Duox1抑制剂、自由基清除剂或PKC抑制剂及PKCδ/θ抑制剂后，ROS生成受到明显抑制，Duox1和MUC5AC mRNA及蛋白表达减少 (P<0.05)；而给予PKCα/β后，ROS的生成、Duox1和MUC5ACmRNA及蛋白的表达与HNE组比较无明显变化 (P>0.05)。结论 在体外细胞模型实验中，HNE可通过PKCδ/θ-Duox1-ROS介导MUC5AC高表达，在气道黏液高分泌的发展过程中起到重要作用。

• 单位
  海南医学院; 海南医学院第一附属医院