基于CRISPR/Cas9技术创建甜菜BvCENH3基因突变体的研究

作者：韩平安; 唐宽刚; 常悦; 孙瑞芬; 王良; 张自强; 付增娟; 赵尚敏; 吴新荣^*; 李晓东^*

来源：北方农业学报, 2023, 51(02): 1-11.

• 甜菜
• BvCENH3
• CRISPR/Cas9
• 基因组编辑
• 基因突变体

【目的】通过CRISPR/Cas9技术对甜菜BvCENH3基因进行编辑，建立甜菜高效基因组编辑技术体系。【方法】以BvCENH3为编辑目标，设计双靶标构建基因编辑载体，通过农杆菌侵染甜菜叶柄获得转基因植株，利用二代测序技术检测转基因植株突变情况，通过微滴数字PCR技术筛选低拷贝编辑植株。【结果】获得82株甜菜转基因植株，其中40株被成功编辑，编辑效率为48.78%，靶标1效率优于靶标2。突变类型有单碱基替换（T→G、A→C）、碱基缺失（TC、TCTC缺失）等5种。筛选出23株低拷贝编辑植株，BvCENH3插入拷贝数为1.1～1.9。【结论】成功对甜菜BvCENH3进行定点编辑，获得40株BvCENH3基因突变体。初步创建了甜菜基因组编辑技术体系，为甜菜单倍育种奠定了理论与技术基础。

• 单位
  内蒙古自治区农牧业科学院