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摘要
目的探讨中性粒细胞对小鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后早期脑损伤(EBI)中细胞焦亡的作用及其潜在机制。方法将76只雄性C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假手术组、SAH组、SAH+溶剂组及SAH+anti-ly6G组, 每组19只。后3组小鼠采用改良线栓穿刺法制备成SAH模型, 其中SAH+溶剂组及SAH+anti-ly6G组小鼠分别于造模前24 h经静脉注射生理盐水或anti-ly6G(4 mg/kg)。造模后24 h时分别对各组小鼠采用免疫荧光染色检测大脑皮层中性粒细胞、消皮素D(GSDMD)、S100钙结合蛋白A8(S100A8)的表达及定位情况, FJC染色检测皮层神经元损伤情况, 改良加西亚评分及转棒实验评估神经功能, 脑组织含水量检测评估脑水肿情况, Western blotting检测皮层组织中S100A8、Toll样受体4(TLR4)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、活化半胱氨酸蛋白酶1(cleaved-caspase1)和活化消皮素D(GSDMD-N)的蛋白表达情况。结果 (1)与假手术组相比, SAH组小鼠损伤侧皮层中出现中性粒细胞浸润, 中性粒细胞中有S100A8大量表达, 且相同区域内GSDMD表达升高并均能与星形胶质细胞、小胶质细胞及神经元共定位。(2)与假手术组相比, SAH组和SAH+溶剂组小鼠损伤侧皮层中性粒细胞浸润数量和FJC阳性神经元数量均明显增多, 改良加西亚评分和转棒实验中掉落时间均明显降低, 脑组织含水量明显增高, S100A8、TLR4、NLRP3、cleaved-caspase1和GSDMD-N的蛋白表达均明显升高, 差异均有统计学意义(P<0.05)。与SAH组和SAH+溶剂组相比, SAH+anti-ly6G组小鼠损伤侧皮层中性粒细胞浸润数量和FJC染色阳性神经元数量均明显减少, 改良加西亚评分和转棒实验中掉落时间均明显增加, 脑组织含水量明显降低, S100A8、TLR4、NLRP3、cleaved-caspase1和GSDMD-N的蛋白表达均明显下降, 差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制中性粒细胞可下调SAH后S100A8的表达, 从而减弱TLR4/NLRP3激活介导的细胞焦亡, 有利于改善EBI。
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单位南方医科大学珠江医院; 广东神经外科研究所; 林芝市人民医院
