酸枣仁提取物靶向5-羟色胺1A受体影响骨骼增长的微小核糖核酸的筛选及功能验证

作者：梁国辉; 王桂芝^*; 谢艳; 毛雯正; 罗石任; 张丽; 吴晓龙

来源：中国中医骨伤科杂志, 2023, 31(12): 7-14.

DOI：10.20085/j.cnki.issn1005-0205.231202

• 酸枣仁提取物
• 五羟色胺1A受体
• 小鼠
• 骨骼增长
• 微小核糖核酸
• 筛选

目的:筛选由酸枣仁提取物调控的靶向5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)影响骨骼增长的微小核糖核酸(miRNA),并阐明酸枣仁提取物通过该miRNA调控5-HT1AR影响骨骼增长的作用机制。方法:将大小鼠分别分为正常对照组、用药组、阳性对照组和五羟色胺1A受体选择性抑制剂组，并用不同溶液灌胃。一段时间后观察药物对小鼠体长、血清生长激素和脑组织五羟色胺1A受体表达以及对大鼠慢波睡眠的影响。筛选骨骼增长的小鼠与普通小鼠脑组织差异表达miRNAs,优选以五羟色胺1A受体为靶基因的miRNA并进行qRT-PCR验证。通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-200c-3p与5-HT1AR之间的调控关系，进而培养小鼠脑皮层细胞并鉴定。通过给予高剂量和低剂量药物和过表达及沉默miR-200c-3p, ELISA法观察5-HT1AR的表达，并通过qRT-PCR法观察给药后细胞内miR-200c-3p的表达。结果:用药组小鼠血清生长激素、体长及脑组织五羟色胺1A受体表达均高于其他组；慢波睡眠时长用药组与阳性对照组长于正常对照组和抑制剂组；药物对异相睡眠时期无影响；两个实验组有13个miRNAs表达上调，3个miRNAs表达下调；经qRT-PCR验证调控五羟色胺1A受体的为下调的miR-200c-3p,且双荧光素酶报告基因实验证明miR-200c-3p可以调控5-HT1AR表达。体外培养小鼠脑皮层细胞，过表达miR-200c-3p引起5-HT1AR表达下降，而沉默miR-200c-3p后则5-HT1AR表达升高，且药物对体外培养的脑皮层细胞中miR-200c-3p的表达有调控作用。结论:小鼠体内可能存在酸枣仁提取物，通过调控miR-200c-3p的表达上调五羟色胺1A受体的表达，延长慢波睡眠，进而促进生长激素的分泌，最终促进体长增长。

• 单位
  河南省洛阳正骨医院; 省骨科医院