SP-1通过miR-135b/HIF-1α轴对缺氧诱导心肌细胞损伤的影响

作者：孟庆雯; 杨洋; 魏俊萍; 杨珊珊; 黄珊^*

来源：中国药业, 2020, 29(13): 25-31.

DOI：10.3969/j.issn.1006-4931.2020.13.007

• 特异性蛋白1
• 心肌细胞损伤
• miR-135b
• HIF-1α
• 缺氧

目的探讨特异性蛋白1(SP-1)通过miR-135b/HIF-1α轴对缺氧诱导的心肌细胞损伤的作用。方法 H9c2细胞进行缺氧处理后,转染si-SP-1,miR-135b mimic,anti-miR-135b和CoCl2(HIF-1α激活剂)。采用蛋白质印迹(Western Blot,WB)法检测细胞SP-1和HIF-1α蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测miR-135b表达,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧簇(ROS)含量,酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)的含量,生物信息学软件分析预测并通过荧光素酶报告基因实验验证miR-135b与HIF-1α间的靶向结合作用。结果缺氧后,H9c2细胞内SP-1蛋白表达呈时间依赖性显著升高(P <0. 05),miR-135b表达呈时间依赖性显著降低(P <0. 05)。与对照组(A组)相比,缺氧组(B组)H9c2细胞中SP-1和HIF-1α蛋白表达分别为1. 467±0. 055,1. 437±0. 082(P=0. 014,0. 017),细胞凋亡率[(14. 591±1. 863)%,P=0. 000]、细胞上清液中TNF-α[(5. 270±0. 359) pg/m L,P=0. 012]、IL-1β[(25. 060±1. 212) pg/m L,P=0. 000]、IL-6 [(82. 707±4. 550) pg/m L,P=0. 000]和ROS(1. 239±0. 075,P=0. 021)含量均显著升高(P <0. 05),miR-135b表达(0. 466±0. 071,P=0. 001)和细胞增殖能力[(67. 242±3. 490)%,P=0. 008]均显著降低(P <0. 05);与缺氧+siRNA组(C组)相比,缺氧+si-SP-1组(D组)H9c2细胞中SP-1(0. 238±0. 039,P=0. 001)和HIF-1α的蛋白表达(1. 126±0. 100,P=0. 032)、细胞凋亡率[(4. 668±0. 731)%,P=0. 000]、细胞上清液中TNF-α[(3. 901±0. 354) pg/m L,P=0. 022]、IL-1β[(17. 198±1. 216) pg/m L,P=0. 002]、IL-6 [(56. 742±4. 081) pg/m L,P=0. 017]和ROS(1. 086±0. 090,P=0. 028)含量均显著降低,miR-135b表达(0. 752±0. 094,P=0. 015)和细胞增殖能力[(83. 550±2. 933)%,P=0. 016]均显著升高。miR-135b靶向调控HIF-1α。CoCl2或anti-miR-135b会导致低表达SP-1的缺氧H9c2细胞增殖能力显著降低[(48. 470±2. 831)%比(63. 728±4. 192)%,P=0. 000,0. 021],细胞凋亡率[(41. 076±1. 117)%比(35. 935±1. 776)%,P=0. 000,0. 010]和细胞上清液中TNF-α[(6. 211±0. 408) pg/m L比(5. 250±0. 325) pg/m L,P=0. 019,0. 033]、IL-1β[(43. 417±2. 561) pg/m L比(38. 675±1. 956) pg/m L,P=0. 013,0. 021]、IL-6 [(110. 440±7. 446) pg/m L比(108. 767±6. 589) pg/m L,P=0. 026,0. 031]和ROS [(1. 351±0. 073)比(1. 327±0. 041),P=0. 073,0. 035]的含量显著升高。结论 SP-1低表达通过miR-135b/HIF-1α轴发挥对缺氧诱导的心肌细胞损伤的保护作用。

• 单位
  海南医学院; 第一附属医院心血管内科