UVA致人皮肤成纤维细胞急性和慢性光损伤模型的建立

作者：侯巍; 郑跃; 许庆芳; 刘晨; 陆春; 赖维

来源：临床皮肤科杂志, 2014, 43(12): 703-706.

DOI：10.16761/j.cnki.1000-4963.2014.12.015

• 光老化
• 急性光损伤
• 皮肤成纤维细胞

目的:探讨人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)急性和慢性光损伤模型建立的方法。方法:体外培养原代人皮肤成纤维细胞,选取第48代的细胞进行实验。用长波紫外线(UVA)单次照射建立HDFs急性光损伤模型,荧光倒置显微镜观察不同剂量UVA照射后第1、2、3天HDFs的形态变化;CCK-8法检测照射后HDFs的增殖活性。慢性光损伤HDFs模型采用8-甲氧沙林(8-MOP)避光孵育细胞24h,随后以含8-MOP的磷酸盐缓冲液(PBS)置换培养基,行9J/cm2 UVA照射,照射完成后换Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)(含10%胎牛血清)避光传代培养,21d后显微镜下观察HDFs形态;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色法计算衰老细胞率。结果:单次UVA照射导致HDFs增殖率下降,与UVA剂量呈正相关。UVA在剂量为≤10J/cm2时,细胞存活率保持在>85%;而UVA剂量≥15J/cm2时细胞存活率明显降低;≥20 J/cm2时存活率为50%左右,至25 J/cm2时仅为约25%。慢性光损伤HDFs诱导组(即UVA+MOP组)几乎所有细胞均出现体积变大、细胞颗粒增加等细胞老化的特征性改变;SA-β-Gal染色细胞的阳性率>95%。结论:UVA单次照射可成功建立HDFs急性光损伤模型,UVA联合8-MOP构建HDFs慢性光损伤模型。

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院; 中山大学附属第三医院