抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体真核表达载体的构建及表达

作者：张晓晓; 王芳; 阎岩; 刘梓谕; 于澜; 李璞媛; 张蕾; 张芳琳; 徐志凯; 吴兴安

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2012, (05): 506-509.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.006414

• 汉坦病毒
• 人源化改造
• 二氢叶酸还原酶
• 真核表达
• CHO-K1细胞

目的:构建抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体真核表达载体,在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中获得稳定、高效表达,并对其生物学活性进行初步鉴定。方法:利用基因重组技术将本室前期构建的含有轻、重链嵌合基因的载体PMD18-T-VH和PMD18-T-VL双酶切获得重链、轻链基因后,克隆到前期改构的高效真核表达载体pCI-neo-M中,用脂质体法转染野生型CHO-K1细胞,在G418和氨甲喋呤(MTX)双筛选压力下筛选稳定高效表达细胞株,ELISA方法检测重组蛋白的表达,用Protein A HP Spin Trap纯化目的蛋白后进行SDS-PAGE和Western blot法检测,并通过体外中和实验检测其中...

• 单位
  第四军医大学