慢病毒介导沉默P75神经营养因子受体联合神经生长因子过表达促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖

作者：王宁; 陈俊毅; 朱伦井; 段江涛; 王烨; 黎智君; 贝朝涌^*

来源：中国组织工程研究, 2020, 24(25): 3988-3993.

• 骨髓间充质干细胞
• 慢病毒
• P75神经生长因子受体
• 神经生长因子
• 转染
• 细胞增殖

背景:P75神经营养因子受体(P75 Neurotrophin receptor,P75NTR)是神经生长因子(nerve growth factor,NGF)的受体之一。在各种细胞组织中发挥着促进增殖或凋亡的双重作用,且P75NTR在骨折不愈合处存在高表达,而过量的NGF可关闭P75NTR受体,从而挽救受损的细胞。因此研究沉默P75NTR联合NGF过表达共转染对骨髓间充质干细胞增殖的影响,可为临床治疗骨折不愈合提供新思路。目的:观察慢病毒介导沉默P75NTR联合NGF过表达共转染对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法:体外培养至第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞分为空白对照组、阴性对照组、沉默p75NTR组、NGF过表达组、沉默p75NTR联合NGF过表达组。将慢病毒介导沉默P75NTR、过表达NGF转染至大鼠骨髓间充质干细胞,倒置荧光学显微镜观察慢病毒转染第3天细胞形态变化,流式细胞仪检测转染效率及Westernblot方法检测P75NTR和NGF的表达,最后用MTT法和CCK-8法检测各组细胞增殖活性。结果与结论:①共转染慢病毒后的细胞生长、分布良好;双基因慢病毒载体的转染效率已超过70%;②与空白对照组和阴性对照组比较,沉默P75NTR联合NGF过表达组P75NTR蛋白表达明显下调,NGF蛋白表达明显增加;③与空白对照组与阴性对照组相比,沉默P75NTR联合NGF过表达组、沉默P75NTR组、NGF过表达组细胞增殖明显加快,差异有显著性意义(P <0.05),其中沉默P75NTR联合NGF过表达组增殖最快;④结果显示:沉默P75NTR联合NGF过表达共转染可促进SD大鼠骨髓间充质干细胞的增殖。

• 单位
  桂林医学院附属医院; 桂林医学院