基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成中多位点缺失突变的校正方法

作者：范华昊; 王娟; 安小平; 王晓娜; 李建彬; 陈斌; 李存; 米志强; 童贻刚

来源：生物技术通讯, 2011, (03): 366-369.

• 基孔肯雅病毒
• 非结构蛋白基因
• 基因合成
• 多位点缺失突变的校正 Chikungunya virus
• non-structure protein gene
• gene synthesis
• correction of multi-site deletions

目的:建立一种PCR方法,以快速校正基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成过程中发生的多位点缺失突变。方法:用PCR方法合成基孔肯雅病毒非结构蛋白基因;对测序的克隆进行序列比对,分析不同克隆上缺失突变发生的位置,以保守区域互相重叠的寡核苷酸为上下游引物、以该区域测序正确的克隆为模板进行PCR扩增,得到所需片段,再将这些片段用PCR方法进一步组装成完整的基因序列并进行测序。结果:测序结果表明,经过2次PCR扩增,校正了基孔肯雅病毒非结构蛋白基因合成过程中发生的5个位点缺失突变。结论:得到序列正确的基孔肯雅病毒非结构蛋白基因。在进行基因合成过程中如发生多位点缺失突变,可利用该方法同时对以上突变进行校正,无...

• 单位
  基础医学院; 中南大学; 病原微生物生物安全国家重点实验室; 军事医学科学院