新孢子虫GRA16和MYR2基因功能的初步研究

作者：杜博亚; 李新; 王晓岑; 常乐; 张西臣; 宫鹏涛; 张楠; 杨举; 李建华^*

来源：中国病原生物学杂志, 2020, 15(05): 533-540.

DOI：10.13350/j.cjpb.200508

• 新孢子虫
• CRISPR-cas9
• NcGRA16
• NcMYR2

目的制备抗新孢子虫致密颗粒蛋白NcGRA16和原癌基因调控蛋白NcMYR2多克隆抗体,对NcGRA16和NcMYR2蛋白进行亚细胞定位;构建NcGRA16基因敲除虫株(△NcGRA16)和NcMYR2基因敲除虫株(△NcMYR2),探究NcGRA16和NcMYR2蛋白在虫体入侵、生长及致病中的作用。方法原核表达NcGRA16和NcMYR2蛋白,纯化后免疫小鼠,制备抗NcGRA16和NcMYR2蛋白多克隆抗体,免疫荧光法观察NcGRA16和NcMYR2蛋白亚细胞定位;运用CRISPR-cas9技术构建△NcGRA16和△NcMYR2虫株,通过噬斑试验、入侵试验、增殖试验、逸出试验和动物试验探究NcGRA16和NcMYR2蛋白在虫体入侵、生长及致病中的作用。结果成功制备抗NcGRA16和NcMYR2蛋白多克隆抗体,免疫荧光法观察NcGRA16蛋白定位于虫体致密颗粒中,NcMYR2蛋白定位于虫体高尔基体;成功构建△NcGRA16和△NcMYR2虫株,与野生虫株相比△NcGRA16虫株的噬斑面积减小(P<0.05);入侵率降低(P<0.05)。与感染野生虫株小鼠相比,感染△NcGRA16虫株的小鼠死亡时间延长3～5d;血清中IL-6和INF-γ显著下降(P<0.05);脑、心和脾荷虫量显著降低(P<0.05);脑和心脏病理变化减轻。感染△NcMYR2虫株的小鼠死亡时间延长1～2d;血清中IL-6水平显著下降(P<0.05)。结论NcGRA16为新孢子虫入侵和毒力相关基因,敲除NcMYR2基因对虫体的生长、入侵及毒力等无明显影响,这为揭示新孢子虫致病机制和新孢子虫病防控提供了理论依据。

• 单位
  吉林大学