江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性及击倒抗性突变分析

作者：王冠熙; 李雅姝; 李月月; 曹园园; 杨蒙蒙; 张梅花; 吴竞瑶; 梁成; 李菊林; 周华云; 唐建霞^*; 朱国鼎

来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志, 2022, 40(04): 468-480.

• 白纹伊蚊
• 溴氰菊酯
• CDC生物瓶法
• 抗药性
• 击倒抗性突变

目的 了解江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性，探究其与击倒抗性(kdr)基因突变的关联，为白纹伊蚊科学防治提供理论依据。方法 用美国疾病预防与控制中心生物瓶法制备溴氰菊酯含量为1、 2、 4、6和8μg/瓶的测试瓶和不含溴氰菊酯的对照瓶，每瓶放10～25只实验室培养的敏感品系白纹伊蚊，确定诊断剂量。2020年8—9月，分别从徐州市睢宁县、淮安市淮阴区和无锡市宜兴市采集白纹伊蚊的幼虫或蛹，培养至子一代(F1代)，取10～25只F1代雌蚊置含诊断剂量溴氰菊酯的测试瓶或对照瓶中充分接触30 min，计算白纹伊蚊的死亡率，评价其抗性水平。提取抗性测试后蚊虫的DNA, PCR扩增电压门控钠离子通道(VGSC)跨膜结构域Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的基因编码区并测序，用Bioedit、 Seqman等软件分析kdr基因突变情况，统计kdr基因型和突变频率，抗性表型与敏感表型蚊虫kdr突变率的差异使用χ2检验。结果 用实验室敏感品系白纹伊蚊确定的溴氰菊酯诊断剂量为4μg/瓶。从睢宁县、淮阴区和宜兴市共采集到白纹伊蚊149只。睢宁县的白纹伊蚊在诊断剂量下的校正平均死亡率为(28.2±1.4)%，淮阴区和宜兴市的平均死亡率分别为(64.4±5.5)%、(56.3±17.7)%,3个县(市、区)的白纹伊蚊对溴氰菊酯均已产生抗药性。共获得DNA序列447条，测序结果显示，3个县(市、区)白纹伊蚊VGSC结构域Ⅳ的基因编码区1532和1534位点均存在kdr基因突变，其中1532位点共有2种等位基因，分别为野生型ATC/I (279/298, 93.6%)和突变型ACC/T (19/298, 6.4%)；组成3种基因型，分别为野生型纯合子I/I (133/149, 89.3%)、野生型/突变型杂合子I/T (13/149, 8.7%)和突变型纯合子T/T (3/149, 2.0%)。1534位点共有4种等位基因，分别为野生型TTC/F (275/298, 92.3%)和突变型TCC/S (5/298, 1.7%)、 TTA/L(14/298, 4.7%)和TTG/L (4/298, 1.3%)；组成4种基因型，分别为野生型纯合子F/F (128/149, 85.9%)、突变型/野生型杂合子F/S (5/149, 3.4%)和F/L (14/149, 9.4%)，突变型纯合子L/L (2/149, 1.3%)。72只有抗性表型的白纹伊蚊成蚊中，1532、 1534位点野生型分别占87.5%(63/72)和86.1%(62/72), kdr基因突变型分别占12.5%(9/72)和13.9%(10/72); 77只敏感表型白纹伊蚊成蚊中，1532和1534位点野生型分别占90.9%(70/77)和85.7%(66/77), kdr基因突变型分别占9.2%(7/77)和14.3%(11/77)。抗性表型和敏感表型个体中，1532和1534位点kdr基因突变型间的差异无统计学意义(χ2=0.168、 4.111, P> 0.05)。结论 江苏省睢宁县、淮阴区和宜兴市的白纹伊蚊对溴氰菊酯均产生抗药性，但1532和1534位点kdr基因突变频率均较低，未发现抗性表型与1532位点、 1534位点kdr基因突变的相关性。

• 单位
  江苏省血吸虫病防治研究所