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摘要
为了结合转基因方法探索结缕草基因功能，建立高效、快速的结缕草原生质体制备及瞬时基因表达系统，利用正交试验对影响原生质体制备的主要因素进行优化，同时利用原生质体进行亚细胞定位和蛋白互作研究。结果表明，当酶配比为2%(w/v) cellulase R10和1.5%(w/v) macerozyme R10，酶解时间为7 h时，原生质体产量和活性均达到最高，分别为1.23×107个·mL-1和98%以上，满足后续转化所需。多次重复试验表明，加入5～10μg质粒，原生质体转化率可达75%以上。利用原生质体转化体系进行了亚细胞定位检测，结果发现结缕草ZjNOL和ZjNYC1定位在叶绿体中，ZjZFN定位在细胞核中。双分子荧光互补分析证明ZjNOL和ZjNYC1在叶绿体中相互作用。原生质体制备及转化方法与遗传学和组学技术相结合，能够为结缕草基因功能研究和基因编辑提供支持。
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