猪CD205分子CysR-FNⅡ截短基因的克隆表达及应用

作者：高文昊; 杜露平; 侯立婷; 于晓明; 陈瑾; 冯秀丽; 郑其升; 程海卫^*

来源：江苏农业学报, 2022, 38(05): 1272-1277.

• 猪
• CD205
• CysR-FNⅡ截短基因
• 原核表达
• 生物学活性

为克隆表达编码猪CD205分子的CysR-FNⅡ截短基因片段，并验证其生物学活性，提取了猪淋巴组织总RNA,并合成cDNA,利用PCR方法扩增编码猪CD205分子的CysR-FNⅡ截短基因，构建pET-32a-CysR-FNⅡ原核重组表达质粒，转化至大肠杆菌BL21,分别进行诱导表达与蛋白质纯化，利用制备的目的蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体，经间接免疫荧光试验和流式细胞分析鉴定。SDS-PAGE与Western Blot鉴定结果显示，目的蛋白以可溶性形式表达，大小约4.0×104,与理论值一致。一次免疫后14 d抗体效价达1∶3 200。间接免疫荧光试验和流式分析结果显示，获得的多克隆抗体可与猪骨髓来源树突状细胞发生特异性结合。说明该重组表达蛋白质具有相应的生物学活性，可用于猪CD205抗原靶向研究。

• 单位
  江苏省农业科学院; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心