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摘要
铁摄取调节蛋白(ferric uptake regulator， Fur)是控制铜绿假单胞菌铁代谢和毒力的关键调节因子。许多课题组尝试构建铜绿假单胞菌fur的缺失突变株均失败，因此铜绿假单胞菌的fur一直被认为是必需基因，这导致其生物学功能一直未得到全面的解析。【目的】构建铜绿假单胞菌fur的缺失突变株，并对该突变株的表型进行分析。【方法】以铜绿假单胞菌PAO1为亲本菌株，通过同源重组的方法构建fur缺失突变株，研究该基因对铜绿假单胞菌生长、铁载体生物合成、抗氧胁迫能力、鞭毛形成、生物被膜形成和毒力等的影响。同时，通过遗传分析对fur缺失突变株生长缺陷表型的原因进行探究。【结果】本研究成功构建了铜绿假单胞菌fur基因的缺失突变株，发现缺失突变fur极大地限制了铜绿假单胞菌的生长能力，并降低了该菌对限铁环境的生长适应性，但不影响该菌对高铁环境的生长适应性。铜绿假单胞菌Δfur的这种生长缺陷表型是细胞生长增殖变慢造成的，而不是诱导细胞死亡引起的。有趣的是，其他异源的fur基因能完全互补Δfur的这种生长缺陷表型，暗示铜绿假单胞菌的Fur蛋白在功能上不存在独特性。尽管Fur与毒素-抗毒素系统PacTA存在功能关联性，但是铜绿假单胞菌Δfur的这种生长缺陷表型却与PacT毒素无关。除了影响铜绿假单胞菌的生长表型，缺失突变fur还使铜绿假单胞菌丧失了对铁载体生物合成的抑制作用，导致该菌对H2O2更敏感并丧失了鞭毛的形成能力，同时降低了该菌对大蜡螟幼虫的毒力。此外，缺失突变fur还显著提升了铜绿假单胞菌的胞内c-di-GMP水平，从而诱导pelF和pslA基因的表达，进而促进铜绿假单胞菌生物被膜的形成。【结论】fur是可以缺失的非必需基因，在铜绿假单胞菌的正常生长、铁载体生物合成、抗氧胁迫能力、鞭毛形成、生物被膜形成和毒力等方面都发挥着十分重要的作用，这为针对铜绿假单胞菌的疫苗和抗菌药物开发奠定了基础。
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单位生命科学学院; 延安大学
