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摘要
目的构建p300基因RNA干扰慢病毒载体获得稳定感染的人鼻咽癌CNE-2细胞株,以观察CNE-2细胞中p300的表达及其功能。方法设计p300基因特异性RNA干扰靶序列,与经Hpa I和Xho I酶切后的载体连接,产生重组慢病毒质粒p LL-GFP-Puro-shp300,筛选阳性克隆,测序鉴定,与慢病毒包装载体共转染293T细胞,包装产生慢病毒,对病毒滴度和感染效率进行检测。结果 p LL-GFP-Puro-shp300慢病毒RNA干扰载体经酶切和测序鉴定证实准确连接测序正确,且包装出来的病毒纯化后滴度达107TU·m L-1。RT-q PCR、Western blot结果显示感染后p300 mRNA及蛋白水平显著下降,证明重组慢病毒对CNE-2细胞p300基因表达有明显沉默作用。结论成功构建靶向p300基因RNA干扰慢病毒载体,为进一步研究p300在鼻咽癌发生过程中的作用奠定基础。
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