miR-216b-5p靶向ATG5介导自噬逆转食管癌Eca109细胞的顺铂耐药性

作者：邱善婷; 李晓燕; 陈哲聪; 高梦源; 金舒怡; 陈文虎^*

来源：中国肿瘤生物治疗杂志, 2023, 30(07): 552-559.

• 食管癌
• Eca109/DDP细胞
• miR-216b-5p
• 自噬
• 增殖
• 凋亡
• 顺铂耐药

目的：探讨miR-216b-5p对食管癌Eca109细胞顺铂（DDP）耐药性的影响及其作用机制。方法:采用qPCR法检测miR-216b-5p在食管癌细胞TE-1、KYSE-150、Eca109和耐药细胞Eca109/DDP中的表达水平。利用脂质体转染技术分别将miR-216b-5p mimic及mimic NC、自噬相关蛋白5(ATG5)过表达质粒转染到Eca109/DDP细胞中，用CCK-8、EdU法和FCM分别检测转染后细胞的增殖和凋亡；m RFP-eGFP-LC3双荧光标记实验检测mRFP-eGFP-LC3慢病毒感染后各组细胞自噬发生情况，WB法检测自噬相关蛋白LC3、Beclin 1和P62表达。用荧光素酶报告基因实验验证miR-216b-5p与ATG5的靶向关系，WB法检测ATG5的表达。建立裸鼠Eca109/DDP细胞移植瘤模型，观察miR-216b-5p过表达对移植瘤生长的影响。结果：miR-216b-5p在TE-1、KYSE-150、Eca109和Eca109/DDP细胞中均呈低表达（均P<0.05）。过表达miR-216b-5p可显著抑制Eca109/DDP细胞的增殖并诱导凋亡（均P<0.05），减少细胞中自噬小体数量（P<0.05），下调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1蛋白水平、上调P62蛋白水平（均P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验证实miR-216b-5p靶向并负调控ATG5的表达（P<0.05），过表达ATG5可使miR-216b-5p mimic对Eca109/DDP细胞增殖、自噬的抑制作用和凋亡的诱导作用明显减弱（均P<0.05），自噬相关蛋白P62表达降低、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值和Beclin 1表达升高（均P<0.05）。荷瘤实验结果表明，miR-216b-5p过表达可显著抑制裸鼠移植瘤的生长（P<0.05）。结论：miR-216b-5p过表达可逆转食管癌Eca109/DDP细胞对DDP的耐药性，其机制可能与靶向负调控ATG5表达并影响细胞自噬有关。

• 单位
  杭州医学院