科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
【目的】在深海来源穿梭载体p SW2的基础上构建低温诱导高效表达载体,为最终获得环境污染物高效降解菌提供基础和工具。【方法】通过最小化敲除实验确定载体必需基因,以绿色荧光蛋白GFP为报告基因检测载体的表达能力变化,进一步添加纯化标签、多克隆位点及替换启动子等改造获得低温诱导表达载体pSW4。【结果】敲除实验结果显示编码单链结合蛋白的基因fps B敲除后载体的表达效率显著提高。以GFP为报告基因检测发现,pSW4的表达效率较pSW2有显著提升(4°C条件下提高10.7倍)。以深海细菌Shewanella piezotolerans WP3为宿主菌,应用pSW4为表达载体表达深海细菌Shewanella psychrophila WP2的聚合酶亚基,检测显示其在Mg2+条件下具有切割单链DNA的核酸酶活性,而在Mg2+或Mn2+条件下具有切割双链DNA的核酸酶活性。【结论】构建了低温诱导表达载体pSW4,并证实了其适用性,有助于今后构建环境修复菌及相关的应用性研究。
-
单位微生物代谢国家重点实验室; 上海交通大学; 生命科学技术学院
