大鼠SLPI基因siRNA重组表达载体构建及其在调控真皮多能干细胞增殖中的作用

作者：蔡俊; 屈纪富

来源：第三军医大学学报, 2016, 38(04): 356-360.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201509077

• 分泌型白细胞蛋白酶抑制因子
• 重组表达载体
• 真皮多能干细胞
• 增殖

目的观察分泌型白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)对真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,DMSCs)的促增殖作用。方法酶消化法分离、纯化、扩增新生大鼠DMSCs。在前期成功构建SLPI基因过表达载体基础上,根据SLPI基因si RNA的设计挑选出最佳抑制SLPI基因表达的干扰载体,RT-PCR、Western blot鉴定。重组表达载体转染DMSCs,观察其表达,运用CCK-8法和流式细胞术检测细胞周期,观察SPLI基因促进DMSCs的增殖作用。结果成功分离获得真皮来源、具有细胞干性的DMSCs;并成功构建SLPI基因过表达真核载体及SLPI基因si RNA表达载体,转染DMSCs(分为过表达组和干扰组,并以转染空载体者为对照组)。CCK-8检测显示,48、72、96 h,过表达组增殖较快,干扰组增殖较慢,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);72、96 h,过表达组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),说明过表达组增殖较快,即SLPI基因有促进增殖作用。流式细胞检测表明,过表达组G1期与干扰组比较差异有统计学意义(P<0.05),S期、G2期与对照比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SLPI基因具有明确的促DMSCs增殖作用,促进细胞从G1向S和G2期转变,即通过调控细胞周期发挥促增殖作用。