一种可分泌多种活化型因子的工程细胞的建立

作者：周梦磊; 杨蓓蓓^*; 曹江^*

来源：中国细胞生物学学报, 2022, 44(10): 1925-1934.

DOI：10.11844/cjcb.2022.10.0005

• 生长因子
• 神经营养因子
• 分泌
• 干细胞
• 工程细胞

该研究目的是构建可分泌多种活化型因子的工程细胞,用于诱导干细胞分化为耳蜗神经元样细胞的共培养。首先将大鼠脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)和神经营养因子3(neurotrophin 3, NT3)的成熟肽编码序列用内部核糖体进入位点序列(internal ribosome entry site, IRES)连接起来,再插入慢病毒表达载体pLVX-IRES-tdTomato,并包装成慢病毒,再将慢病毒分别感染HEK293T细胞和已有的表达活化型表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)、胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1, IGF1)和成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2, FGF2)的HEK293T/3GF细胞,采用有限稀释法获得稳定转染的细胞克隆,利用Western blot检测细胞培养液上清中的BDNF和NT3的表达情况,并通过检测人肺癌A549细胞和大鼠嗜铬细胞瘤PC-12细胞的增殖以及PC-12细胞的分化情况对细胞表达的因子活性进行鉴定。结果表明,可同时表达分泌活化型EGF、IGF1、FGF2、BDNF和NT3的工程细胞构建成功,为后续干细胞共培养和诱导分化研究提供了有力工具。

• 单位
  浙江大学医学院附属第二医院