鸭源H6N6亚型AIV荧光定量PCR方法的建立及应用

作者：陈佳琪; 嵇辛勤; 段志强; 阮涌; 龙丹丹; 文明^*

来源：生物技术, 2022, 32(02): 159-181.

DOI：10.16519/j.cnki.1004-311x.2022.02.0025

• 鸭
• H6N6亚型禽流感
• M基因
• 荧光定量
• 建立

[目的]为检测鸭感染H6N6亚型AIV后排毒及在组织器官病毒分布情况。[方法]通过建立H6N6亚型AIV荧光定量PCR检测方法，以H6N6亚型AIV M基因保守序列设计特异性引物，将分离到的H6N6亚型AIV病毒反转录为cDNA,进行pMD18-T-M基因克隆质粒构建，以其为标准品建立荧光定量PCR标准曲线，并进行敏感性和重复性试验，利用所建立的方法检测鸭感染H6N6亚型AIV后排毒及在组织器官病毒分布情况。[结果]该方法灵敏度高，最低检测到1.0×101 copies/μL,从而可以得出拷贝数与Ct值之间的线性关系曲线表达式：Ct=-3.408×lg Copynumber+33.773(R2=0.998),线性范围为1.0×107～1.0×101拷贝/μL,熔解峰的熔解温度在83℃左右。[结论]表明建立的鸭源H6N6亚型AIV荧光定量PCR检测方法，特异性强，重复性好，为后续实验研究提供了技术和数据支撑。

• 单位
  动物科学学院; 贵州大学