稳定高表达miR-449c的5637膀胱癌细胞株的建立

作者：万鹏飞; 黄亚琴; 王志; 王欢欢; 石家仲; 杨劲; 陈志文

来源：细胞与分子免疫学杂志, 2016, 32(06): 760-769.

DOI：10.13423/j.cnki.cjcmi.007783

• microRNA
• miR-449c
• 膀胱癌
• C-myc
• 稳定细胞株

目的构建稳定表达miR-449c的人膀胱癌细胞株。方法以HEK293细胞基因组DNA作为模板,采用高保真酶进行扩增得到pre-miR-449c序列,将所得目的片段克隆到Ftet UGW-T载体上;经测序鉴定后,感染5637人膀胱癌细胞;经嘌呤霉素筛选后,利用倒置荧光显微镜观察筛选后的细胞增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达强度,采用荧光实时定量PCR检测miR-449c的表达,Western blot法检测其下游靶基因C-myc蛋白的水平。结果成功构建了Ftet UGW-T/miR-449c慢病毒载体,慢病毒包装后感染5637人膀胱癌细胞成功表达EGFP,感染后的细胞中高表达miR-449c,在稳定表达的膀胱癌细胞中C-myc蛋白表达较对照组显著降低。结论成功构建了稳定高表达miR-449c的5637膀胱癌细胞株。

• 单位
  第三军医大学; 第三军医大学第一附属医院