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摘要
目的探讨丹参酮ⅡA是否能抑制高糖诱导的小鼠耳蜗血管纹周细胞的凋亡及可能机制, 为治疗糖尿病性听力损失提供参考。方法 C57BL/6J雄性小鼠40只, 分为对照组、糖尿病(DM)组、糖尿病+丹参酮ⅡA组、丹参酮ⅡA组, 每组10只。制备2型糖尿病模型。将原代周细胞分为对照组、高糖(HG)组、HG+丹参酮ⅡA(1、3、5 μmol/L)组、HG+丹参酮ⅡA+LY294002(PI3K/AKT通路抑制剂)组、LY294002组、丹参酮ⅡA组、二甲基亚砜(DMSO)组。ABR检测听力阈值;硫代巴比妥酸试验(thiobarbituric acid, TBA)检测耳蜗氧化应激水平;苏木精-伊红染色(HE)观察耳蜗血管纹形态变化;Evans blue检测耳蜗血管纹血迷路屏障通透性;免疫荧光观察耳蜗血管纹周细胞凋亡蛋白的表达;流式细胞术检测周细胞凋亡率;DCFH-DA结合流式细胞术检测周细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量, 免疫蛋白印记(Western Blot, WB)法检测周细胞凋亡蛋白(Cleaved-caspase3、Bax)、抗凋亡蛋白(BCL-2)以及通路蛋白(PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT)的表达。采用 SPSS软件进行统计分析, 行独立样本t检验, 以P<0.05为差异有统计学意义。结果动物实验:丹参酮ⅡA可降低DM组[(35.0±3.5)dB SPL比(55.3±8.1)dB SPL]听力阈值(t=4.899, P<0.01), 降低耳蜗内氧化应激水平(t=4.384, P<0.05), 改善耳蜗血管纹结构紊乱、萎缩, 空泡增多的现象。丹参酮ⅡA可缓解DM小鼠耳蜗血管纹血迷路屏障通透性[Evans blue渗漏(6.84±0.27)AU比(8.59±0.85)AU]增加的现象(t=2.770, P<0.05), 可逆转周细胞凋亡蛋白Cleaved-caspase3(t=4.956, P<0.01)和 Bax(t=4.388, P<0.05)的表达。细胞实验:丹参酮ⅡA可降低高糖干预下的周细胞内ROS含量, 且呈浓度依赖性(t=3.569, P<0.05;t=4.772, P<0.01;t=7.494, P<0.01);丹参酮ⅡA可降低高糖干预下的周细胞凋亡率和凋亡蛋白, 增加抗凋亡蛋白、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT的表达, 且均呈浓度依赖性(P值均<0.05);LY294002可逆转丹参酮ⅡA对周细胞凋亡的保护作用(P值均<0.05)。结论丹参酮ⅡA可通过降低高糖环境下的氧化应激水平以及激活PI3K/AKT信号通路, 抑制高糖诱导的小鼠耳蜗血管纹周细胞凋亡, 从而发挥对糖尿病性听力损失的保护作用。
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