亚砷酸钠对HaCaT细胞DNA甲基转移酶的影响及N-乙酰半胱氨酸的干预效应

作者：韩进美; 黄红茜; 李凤敏; 张爱华; 韩雪^*

来源：环境与职业医学, 2020, 37(03): 205-210.

DOI：10.13213/j.cnki.jeom.2020.19698

• 亚砷酸钠
• HaCaT细胞
• 氧化应激
• DNA甲基转移酶

[背景]砷暴露可致人皮肤病变,砷所致的DNA甲基化改变是其主要的致病机制之一,但砷如何引起DNA甲基化改变目前尚未明确。[目的]本研究以永生化的人皮肤角质形成细胞(HaCaT)为研究对象,检测亚砷酸钠(NaAsO2)暴露对HaCaT细胞DNA甲基转移酶(DNMTs)m RNA和蛋白表达水平的影响,并探讨砷所致氧化应激与其所致DNMTs mRNA和蛋白表达水平改变之间的关联。[方法]给予HaCaT细胞不同浓度的NaAsO2(0、0.625、1.25、2.50μmol·L-1)处理,干预组给予10.0μmol·L-1抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理4 h后加入2.50μmol·L-1 NaAsO2,染毒时间为72 h。应用免疫荧光法检测细胞活性氧(ROS)含量,生化法检测细胞内丙二醛(MDA)含量,实时荧光定量PCR法检测细胞DNMT1、DNMT3a和DNMT3b mRNA水平,Western blotting法检测DNMTs蛋白水平。[结果]不同浓度NaAsO2处理HaCaT细胞72 h后,HaCaT细胞ROS含量、MDA水平随染毒浓度的增加而升高(F趋势=441.675,P <0.001;F趋势=22.430,P=0.012);1.25、2.50μmol·L-1浓度组DNMT1 mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(P <0.05)。随染毒浓度的增加,DNMT1m RNA及蛋白表达水平升高(F趋势=30.280,P=0.001;F趋势=40.421,P <0.001),DNMT3a mRNA及蛋白表达水平降低(F趋势=226.283,P <0.001;F趋势=30.848,P=0.001),DNMT3b蛋白表达水平升高(F趋势=15.095,P=0.005);各染毒组DNMT3b mRNA表达水平与对照组相比,差异无统计学意义(P> 0.05)。NAC处理后,与2.50μmol·L-1 NaAsO2单独处理组相比,Ha Ca T细胞ROS含量、MDA水平、DNMT1 mRNA和蛋白表达水平均降低(P <0.05),DNMT3a m RNA及蛋白水平无明显改变(P> 0.05),DNMT3b蛋白水平降低(P <0.05),m RNA水平无明显改变(P> 0.05)。[结论]NaAsO2可改变HaCaT细胞DNMTs mRNA及蛋白表达水平,这种变化可能与砷所致的氧化应激有关。

• 单位
  贵州医科大学; 公共卫生学院