苗药地锦草对糖尿病肾病大鼠肾小球足细胞相关蛋白表达的影响

作者：李晓颖; 田娅飞; 刘畅; 陈松; 樊丰夷; 张春; 吴欣^*

来源：中国比较医学杂志, 2023, 33(08): 105-113.

• 糖尿病肾病
• 地锦草
• Nephrin
• Desmin
• Angptl4

目的 观察苗药地锦草对糖尿病肾病(diabetic kidney disease, DKD)大鼠肾小球足细胞相关蛋白Nephrin、Desmin和Angptl4表达的影响，明确其在DKD治疗中的作用机制。方法 30只8周龄雄性SD大鼠随机分为：正常对照组(Normal, N组),DKD组(D组),DKD地锦草治疗组(Euphorbia humifusa,E组)。D组与E组大鼠单次尾静脉注射链脲佐菌素(Streptozobocin, STZ)(55 mg/kg)复制DKD模型，N组注射溶媒柠檬酸缓冲液，连续3次24 h尿白蛋白量>5 mg/d可确定为糖尿病肾病成模，5周后D组10只大鼠及E组9只大鼠DKD成模。DKD模型复制成功后，E组大鼠灌胃法服用地锦草300 mg/(kg·d),D组与N组灌胃给予同体积普通双蒸水，各组大鼠灌胃共16周。所有大鼠在处死前称重、每周收集大鼠留尿检测24 h尿白蛋白、留血检测血清白蛋白、尿素氮、肌酐、胆固醇、白蛋白；苏木素-伊红(HE)染色、马松三色染色(Masson)观察肾病理学结构；透射电镜观察足细胞的形态；WT1染色定位足细胞并采用disector/fractionator方法行足细胞计数；免疫组化观察Nephrin、Desmin、Angptl4的蛋白定位；Western blot法检测Nephrin、Desmin、Angptl4、Collagen IV的蛋白表达量；qPCR法检测Nephrin、Desmin、Angptl4、Collagen IV的mRNA含量。结果 D组较N组大鼠血糖、24 h尿白蛋白、尿素、肌酐、胆固醇均明显升高，白蛋白明显降低(P<0.05)。E组大鼠上述各指标均较D组明显改善(P<0.05)。HE及Masson染色可见，N组大鼠肾小球结构完成，系膜细胞及基质正常。D组大鼠肾小球系膜细胞增生，系膜区基质沉积较多。E组大鼠经地锦草灌胃治疗后上述情况得以改善。透射电镜显示N组大鼠肾小球足细胞足突正常，D组大鼠足突融合或消失，E组大鼠足突较完整。WT1染色显示D组足细胞计数较N组减少，E组较D组明显增加(P<0.05)。免疫组化，Western blot及qPCR结果显示，Desmin、Angptl4及Collagen IV蛋白及mRNA在N组表达较少，上述指标在D组表达明显增多(P<0.05),E组大鼠经地锦草治疗后Desmin、Angptl4及Collagen IV蛋白及mRNA的表达较D组明显减少(P<0.05)。D组Nephrin蛋白及mRNA表达较N组明显减少，E组较D组表达增多(P<0.05)。结论 地锦草治疗可以明显减少DKD大鼠足细胞Desmin、Angptl4及Collagen IV的表达并增加Nephrin的表达，有效保护足细胞的机械屏障及电荷屏障，抑制足细胞发生转分化，减轻DKD大鼠的蛋白尿并改善其肾功能。

• 单位
  贵阳市第一人民医院