汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中的克隆及表达

作者：徐昭; 陈锦英; 李力; 杨东靖

来源：天津医药, 2006, 34(07): 436-438.

DOI：10.3969/j.issn.0253-9896.2006.07.002

• 汉坦病毒
• 大肠杆菌
• 克隆
• 基因表达

目的:在大肠埃希菌中克隆和表达汉坦病毒SEO型及HTN型S基因。方法:PCR扩增汉坦病毒SEO型L99株及HTN型Z10株S基因读码区,前者经EcoRI及XhoI双酶切,后者经SacI及XhoI双酶切,将两者定向克隆入pET32a(+),转入感受态E.coliTop10。获取重组质粒,经PCR、双酶切及序列分析鉴定后,转入E.coliBL21感受态,经IPTG诱导表达,其产物经SDS-PAGE和Western-blot检测。结果:SEO型L99株及HTN型Z10株S基因正确克隆于pET32a(+),目的蛋白的分子质量约为67.1ku,表达量占菌体总蛋白的40%以上,Western-blot有特异性条带。结论:SEO型及HTN型汉坦病毒S基因在大肠埃希菌中获得表达,为其后的应用奠定了基础。

• 单位
  天津医科大学; 天津市卫生防病中心