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摘要
目的:制备食源性阪崎肠杆菌高纯度、高特异性单克隆抗体并建立其双抗夹心ELISA免疫检测体系。方法:鉴定阪崎肠杆菌后培养集菌获得免疫原,4次免疫BALB/c小鼠后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞1∶3融合,进行杂交瘤细胞阳性筛选及克隆,制备单克隆抗体后采用辛酸-饱和硫酸铵胺法纯化,纯化后的抗体进行配对及亚型鉴定,并使用棋盘滴定法建立快速检测的双抗夹心ELISA免疫方法。结果:经过阳性克隆筛选以及有限稀释法克隆3次后获得了4株分泌抗阪崎肠杆菌单抗的杂交瘤细胞株2A2、4A9、5A3和6A6,其抗体效价均达1.0×105,选择IgG型的6A6作为酶标二抗,2A2作为包被抗体,捕捉抗体的最佳包被质量浓度为2.50μg·mL-1,检测抗体的最佳稀释质量浓度为1.25μg·mL-1。成功建立了双抗夹心ELISA检测方法,目标菌纯培养条件下其检测限达1.0×103 CFU·mL-1,且与其他数种食源性致病菌无交叉效应。结论:本研究制备的阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体效价高、纯度优异,同时建立了一种简便、实用的双抗夹心ELISA免疫方法。
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