抗非洲猪瘟病毒单链抗体的构建、表达及活性鉴定

作者：王丽娟; 石正旺; 杨波; 麻园; 罗俊聪; 万颖; 宋锐; 田宏^*; 郑海学^*

来源：畜牧兽医学报, 2021, 52(05): 1328-1336.

• 非洲猪瘟病毒
• SOE-PCR
• 单链抗体
• 诊断与防控

制备抗非洲猪瘟病毒(ASFV)猪源单链抗体(ScFv),并对其生物学活性进行鉴定,筛选出具有ASFV反应活性的猪源单链抗体(ScFv),为ASFV的诊断提供新的材料。采集ASFV感染康复猪的外周血,分离淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,以此为模板通过PCR扩增得到猪源IgG重链可变区与轻链可变区基因,利用SOE-PCR技术扩增拼接得到猪源ScFv基因;构建pET-30a-ScFv表达载体,进行蛋白的表达与纯化,用ELISA和IFA鉴定ScFv抗体的反应活性。结果显示,成功扩增出猪源ScFv(VH-VLκ、VH-VLλ)基因,鉴定到1株与ASFV存在反应活性的ScFv(VH-VLλ11)抗体。结果表明,成功筛选到1株与ASFV存在反应活性的ScFv(VH-VLλ11)抗体,为ASFV诊断和防控提供了新型原材料。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室