miR-140-5p靶向Nrf2对高糖诱导的视网膜色素上皮细胞氧化应激的调节作用

作者：张新霞; 陆丽红; 狄文玉; 王小敏; 王保君^*

来源：眼科新进展, 2020, 40(08): 727-730.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2020.0165

• miR-140-5p
• 核因子-类胡萝卜素2相关因子2
• 高糖
• 视网膜色素上皮细胞
• 氧化应激

目的探讨miR-140-5p靶向核因子-类胡萝卜素2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)对高糖诱导的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞氧化应激的调节作用及对应的分子生物学机制。方法使用5 mmol·L-1、10 mmol·L-1、20 mmol·L-1、30 mmol·L-1、50mmol·L-1的葡萄糖分别处理ARPE-19细胞。利用CCK-8法及RT-qPCR检测各葡萄糖浓度下ARPE-19细胞的活力及miR-140-5p、Nrf2 mRNA表达情况。将miR-140-5p inhibitor、miR-140-5p-NC、miR-140-5p-mimic、si-Con或si-Nrf2转染入ARPE-19细胞,根据转染物和葡萄糖浓度不同分组,使用DCFH-DA荧光探针检测各组细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,使用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性试剂盒检测SOD活性;使用RT-qPCR检测不同处理的ARPE-19细胞Nrf2 mRNA表达情况,并通过荧光素酶报告基因实验对靶点进行验证。结果与葡萄糖浓度为5 mmol·L-1时相比,30 mmol·L-1、50mmol·L-1葡萄糖作用下ARPE-19细胞存活率显著降低(P<0.05、P<0.001),而miR-140-5p相对表达量则明显升高(P<0.05、P<0.001)。与50 mmol·L-1葡萄糖+miR-140-5p-NC处理组相比,50 mmol·L-1葡萄糖+miR-140-5p inhibitor处理组细胞存活率显著增加,ROS含量显著降低,SOD活性显著增加(均为P<0.01)。与葡萄糖浓度为5 mmol·L-1时相比,30 mmol·L-1、50mmol·L-1葡萄糖作用下ARPE-19细胞Nrf2 mRNA相对表达量均显著降低(P<0.01、P<0.001)。荧光素酶报告基因实验结果显示,与转染miR-140-5p-NC组相比,转染miR-140-5p-mimic组Nrf2相对荧光素酶活性显著降低,转染miR-140-5p-inhibitor组Nrf2相对荧光素酶活性显著增多,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。在50mmol·L-1葡萄糖浓度下,与转染miR-140-5p-inhibitor+si-Con的ARPE-19细胞比较,转染miR-140-5p inhibitor+si-Nrf2后ARPE-19细胞存活率降低,细胞内ROS含量增高,SOD活性下降(均为P<0.01)。结论 miR-140-5p可能通过靶向Nrf2调节高糖诱导的RPE细胞氧化应激作用。

• 单位
  新乡医学院第一附属医院