五种检测嵌合抗原受体表达方法的比较

作者：王欢禹; 常昊宛; 章崇祺; 金卫林; 魏芳^*

来源：生物技术通报, 2021, 37(12): 265-273.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2020-1511

• 嵌合抗原受体
• 免疫球蛋白G抗体
• 蛋白质 L
• 绿色荧光蛋白
• 实时荧光定量PCR

比较检测新型嵌合抗原受体(CAR)的5种方法。通过慢病毒感染得到稳定表达嵌合抗原受体的细胞。使用免疫球蛋白G抗体染色、蛋白质 L染色、绿色荧光蛋白共表达法、实时荧光定量PCR的绝对定量和相对定量法5种方法检测不同嵌合抗原受体在Jurkat细胞中的表达。成功构建6种CAR慢病毒表达载体(Meso-CAR、Met-CAR、R132H-CAR1-2-GFP、R132H-CAR2-4-GFP、Dupixent-HL-CAR-GFP、Dupixent-LH-CAR-GFP),并得到其对应的CAR稳定表达Jurkat细胞。发现Meso-CAR和Met-CAR可同时用免疫球蛋白G抗体和蛋白质 L染色鉴定其表达(免疫球蛋白G抗体染色效果较优),而其余4种CAR均不可以。对荧光法染色不可行的CAR可使用绿色荧光蛋白共表达法、实时荧光定量PCR的绝对定量和相对定量法间接检测CAR的表达,3种方法的结果之间存在一定的对应性。不同的CAR分子,可用不同方法确定细胞中CAR分子的表达情况。

• 单位
  生命科学技术学院; 上海交通大学