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摘要
目的:研究大黄素对L-02正常肝细胞增殖、周期及凋亡的影响并初探其机制。方法:以大黄素为研究对象,L-02细胞为体外模型,采用MTT法检测不同浓度(20、40、60μmol/L)的大黄素对细胞增殖的影响;采用Hoechst染色观察L-02细胞形态学变化;采用FITC AnnexinV/PI双染法,检测不同浓度的药物处理后细胞凋亡情况;采用PI/RNase法检测药物对细胞周期的影响;利用流式细胞仪检测大黄素对L-02细胞内活性氧和线粒体膜电位的影响;采用荧光定量PCR技术检测肝细胞中Sirt1的mRNA表达水平,采用Western Blot检测凋亡相关蛋白Sirt1、Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达,探讨大黄素细胞毒性的作用机制。结果:大黄素抑制L-02细胞增殖,且呈浓度相关性;Hoechst染色发现随着药物浓度升高,细胞形态发生明显变化,出现核固缩,呈亮蓝色,形成凋亡小体等;实验结果表明大黄素能使L-02细胞内活性氧升高,线粒体膜电位水平下降,细胞中谷胱甘肽含量降低;与对照组比较,3个大黄素组L-02细胞出现明显的凋亡细胞,且细胞凋亡率随大黄素浓度增大而逐渐升高;40、60μmol/L大黄素组L-02细胞处于G0/G1期的细胞数减少,S期的细胞增多,表明大黄素能将L-02细胞的细胞周期阻滞在S期。PCR结果显示3个大黄素组能够使Sirt1的mRNA表达水平不同程度降低;Western Blot结果显示3个大黄素组可以不同程度地降低Sirt1、Bax、Caspase-3蛋白的表达,同时升高Bcl-2蛋白的表达。结论:大黄素在体外对L-02肝细胞的增殖具有明显抑制作用,其机制可能是通过降低Sirt1的表达,使线粒体功能受损,增加活性氧的产生,从而引起细胞凋亡。
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