分析超速离心技术研究膜蛋白TmrAB

作者：褚文丹; 徐扬; 周翠燕; 芦亚菲; 于晓霞; 张瑞轩; 李文奇^*

来源：生物化学与生物物理进展, 2018, 45(10): 1047-1053.

DOI：10.16476/j.pibb.2018.0200

• 分析超速离心
• 分子排阻层析
• 冷冻电镜
• 膜蛋白
• 分子质量

去垢剂在膜蛋白的提取纯化过程中起到必要的作用,对膜蛋白的聚合状态、结晶条件以及理化性质等方面都有较大影响.分析超速离心技术(analytical ultracentrifuge,AUC)通过测定溶液中膜蛋白-去垢剂复合物在离心场中的沉降运动轨迹,可以分析获得其沉降系数、摩尔质量、流体力学半径、结合常数等水力学和热力学性质,进而判断膜蛋白-去垢剂复合物的均一性及聚合状态.本文以嗜热菌来源的ATP结合转运蛋白(ABC transporter)TmrAB作为研究对象,利用分析超速离心技术结合分子排阻层析和冷冻电镜负染技术,研究其均一性、聚合状态以及去垢剂与膜蛋白的摩尔比.结果显示,在8倍临界胶束浓度(critical micelle concentration,CMC)的DDM条件下,TmrAB性质均一,并以异二聚体的单体形式存在,DDM与Tmr AB的摩尔比为116∶1.本研究表明,分析超速离心技术是一种测定膜蛋白分子质量、研究膜蛋白聚合状态的可靠手段.

• 单位
  清华大学; 中国科学院生物物理研究所; 生命科学学院