禽蛋黄过敏原Gal d 6的重组表达、纯化鉴定

作者：黄伦辉; 鲍会静^*; 张嘉懿; 李军普; 崔亚琼; 李柳栩; 刘运德; 李会强

来源：食品工业科技, 2020, 41(13): 118-127.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2020.13.019

• rGal d 6
• 重组表达
• 禽蛋黄过敏
• 特异性IgE

目的:建立表达蛋黄Gal d 6重组蛋白工程菌,并鉴定重组Gal d6蛋白免疫活性。方法:直接合成Gal d 6DNA,与p ET-28a构建重组质粒,转化E.coli BL21经IPTG诱导表达;优化表达条件制备重组Gal d 6蛋白,经镍离子亲和层析柱纯化得到纯品蛋白;纯化Gal d6蛋白经间接ELISA及western blot鉴定Gal d 6蛋白免疫活性。结果:经DNA测序、SDS-PAGE、禽蛋过敏血清鉴定表达Gal d 6蛋白具有免疫活性,经镍柱亲和层析获得单一条带。该工程菌最佳表达条件为37℃,0.5 mmol/L IPTG,2 h,收获量每升菌液可收获重组蛋白约9.1 mg。重组蛋白与禽蛋过敏血清具有良好反应性。结论:建立稳定表达具有免疫活性的Gal d 6蛋白的工程菌株。

• 单位
  天津医科大学; 天津市儿童医院; 天津市南开医院