利用人胚胎干细胞来源的Runx1c-mNeonGreen报告细胞系追踪成年造血过程

作者：朱瑶瑶; 张朔; 王征宇^*

来源：生物技术进展, 2020, 10(05): 524-533.

DOI：10.19586/j.2095-2341.2020.0080

• 人胚胎干细胞
• 成年造血
• Runx1c
• 报告细胞系
• CRISPR-Cas9

Runt相关转录因子1c(Runt-related transcription factor 1c,Runx1c)与成年造血以及造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的产生密切相关,为了动态追踪人早期造血发育过程中Runx1c的表达,利用双切质粒载体联合瞬时转入B细胞淋巴瘤-特大(B-cell lymphoma-extra large,BCL-XL)基因的CRISPR-Cas9技术高效地构建了人胚胎干细胞(human embryonic stem cell,hESC)来源的Runx1c-mNeonGreen报告细胞系,并经PCR、Sanger测序验证构建成功。随后,利用免疫荧光技术、实时荧光定量PCR技术、流式细胞术、畸胎瘤实验和数字化核型分析技术进行验证,发现该报告细胞系仍具有hESC样的多能性且未发生染色体异常和变异。此外,通过hESC体外单层诱导造血分化方法,利用流式细胞术追踪人早期造血发育过程中Runx1c的表达,结果表明利用该报告细胞系可以动态追踪人早期造血发育中Runx1c的表达。研究结果为阐明成年造血过程提供了新思路,并为体外产生功能性血细胞提供了可能。

• 单位
  北京协和医学院; 中国医学科学院; 实验血液学国家重点实验室