ALKBH5调控大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的作用研究

作者：周洋; 涂彬; 宋凯; 王娟; 孙赫; 孙峰; 沙纪名; 李锐; 张野; 陶辉^*

来源：安徽医科大学学报, 2022, 57(12): 1870-1874.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2022.12.004

• ALKBH5
• 心肌成纤维细胞
• 心肌纤维化
• 活化
• 增殖

目的 探讨6-甲基腺嘌呤(m6A)去甲基化酶ALKBH5在大鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法 取1～3 d新生SD乳鼠心脏，剪碎消化后进行CFs原代培养，并在显微镜下观察细胞形态。细胞贴壁生长后加入TGF-β1诱导构建CFs活化增殖模型，模型构建成功后分别向各组细胞转染ALKBH5(慢病毒过表达ALKBH5)及慢病毒空载体24～48 h。运用RT-qPCR方法检测ALKBH5、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(CollagenⅠ)和增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA的表达；Western blot检测ALKBH5、α-SMA、CollagenⅠ及PCNA蛋白的表达；CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖活性变化。结果 在CFs活化增殖模型中，与对照组CFs相比，模型组CFs中ALKBH5蛋白和mRNA的表达降低，而与活化增殖相关蛋白PCNA、α-SMA及CollagenⅠ的表达增加。此外，在慢病毒转染ALKBH5过表达组的CFs中，α-SMA、CollagenⅠ和PCNA蛋白和mRNA同ALKBH5病毒空载体组相比表达下降。CCK-8与EdU染色实验表明，与空载体组相比，ALKBH5过表达组CFs增殖活性受到抑制。结论 过表达ALKBH5明显抑制CFs的增殖活性，提示ALKBH5可能是参与调控CFs活化增殖的关键因子。

• 单位
  安徽医科大学; 安徽医科大学第二附属医院