TIGAR基因真核表达载体的构建及在HepG_2细胞中的作用初探

作者：顾志冬; 倪培华; 吴蓓颖; 吴华成; 樊绮诗; 肖家诚

来源：诊断学理论与实践, 2009, (06): 617-622.

DOI：10.16150/j.1671-2870.2009.06.014

• TP53诱导的糖酵解和凋亡调控子
• 人肝细胞癌细胞
• 凋亡 TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator gene
• Human hepatocellular carcinoma
• Apoptosis

目的:构建TP53诱导的糖酵解和凋亡调控子(TIGAR)全长cDNA的真核表达载体pEGFP-TIGAR,观察TIGAR在人肝细胞HepG2中的作用。方法:RT-PCR技术扩增获得TIGAR全长cDNA,将扩增的产物克隆,经酶切、DNA测序鉴定正确,构成pEGFP-TIGAR的真核表达重组质粒。利用脂质体将重组质粒转染入HepG2细胞,流式细胞仪和TUNEL法检测细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞周期、MIB-1(Ki-67抗原测定)法检测细胞增殖、实时荧光PCR检测mRNA表达和Western-blot检测蛋白质的表达。结果:构建完成的真核表达重组质粒pEGFP-TIGAR,经DNA测序与GenB...

• 单位
  上海交通大学医学院附属瑞金医院