异丙酚抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的机制

作者：李继峰

来源：实验与检验医学, 2020, 38(05): 876-881.

• 异丙酚
• 心肌成纤维细胞
• AngⅡ
• 细胞增殖

目的探讨异丙酚(Propofol)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(CFb)增殖的机制。方法选取新生的Wistar大鼠,取其心肌成纤维细胞进行原代培养及分离纯化。采用AngⅡ建立诱导新生大鼠CFb纤维化模型。采用MTT法选取异丙酚抑制AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖的最适宜浓度;将细胞分为3组:正常对照(Control)组、AngⅡ组和异丙酚(Propofol)处理组。采用流式细胞仪测定各组细胞的周期分布;采用ELISA法测定各组细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;采用Western Blot法测定各组细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白表达量;采用免疫细胞化学化法测定各组细胞中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)和经典型蛋白激酶Cα亚型(c PKCα)的蛋白表达。结果 MTT实验结果显示,不同浓度的异丙酚对AngⅡ诱导的大鼠心肌成纤维细胞的增殖均具有一定的抑制作用,100μmol/L的异丙酚对AngⅡ诱导的大鼠心肌成纤维细胞的增殖抑制效果最明显(P<0.01),因此,后续实验选取100μmol/L的异丙酚作用于AngⅡ诱导的大鼠心肌成纤维细胞。流式细胞仪测定结果显示,与正常对照组相比,AngⅡ组细胞G0/G1期细胞百分率降低(P<0.01),S期和G2/M期细胞百分率升高(P<0.01);而异丙酚处理组细胞的G0/G1期细胞百分率高于AngⅡ组(P<0.01),S期和G2/M期细胞百分率低于AngⅡ组(P<0.01)。ELISA测定结果显示,与正常对照组相比,AngⅡ组大鼠的心肌成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原含量增加(P<0.01);而异丙酚处理组大鼠的心肌成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原含量均低于AngⅡ组(P<0.01)。Western Blot法测定结果显示,与正常对照组相比,AngⅡ组大鼠心肌成纤维细胞中TGF-β1的蛋白表达量升高(P<0.01),而异丙酚处理组大鼠心肌成纤维细胞中TGF-β1的蛋白表达量低于AngⅡ组(P<0.01)。免疫细胞组化的结果显示,与正常对照组相比,AngⅡ组大鼠心肌成纤维细胞中ERK1/2和c PKCα的阳性表达均增加(P<0.01);而异丙酚处理组大鼠心肌成纤维细胞中ERK1/2和cPKCα的阳性表达均低于AngⅡ组。结论异丙酚能够抑制AngⅡ诱导的大鼠心肌成纤维细胞的增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的增加,推测其作用机制与其降低细胞中TGF-β1的蛋白表达和抑制ERK1/2、cPKCα通路有关。