稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的U937白血病细胞株的建立及初步特性分析

作者：刘玲玲; 范蕊芳; 赖文兴; 林东军

来源：中山大学学报(医学科学版), 2015, 36(05): 670-675.

DOI：10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2015.0108

• U937细胞株
• p62
• 载体构建

【目的】构建稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的人急性单核细胞白血病U937细胞株,并初步分析过表达p62基因对U937细胞的影响。【方法】首先在空载体MSCV-IRES-GFP(MIG)基础上构建重组质粒MSCV-p62-IRES-GFP(MPIG),分别用MIG及MPIG载体进行病毒包装,并感染U937细胞,用流式细胞分选仪分选出绿色荧光细胞,获得U937-GFP和U937-p62稳定细胞株,利用流式细胞仪及Western blot分别检测GFP细胞的阳性率及p62蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定U937-GFP和U937-p62细胞的生长情况,流式细胞术检测髓系细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达情况。【结果】荧光显微镜观察结果显示,MIG和MPIG病毒感染后,U937-GFP和U937-p62细胞均表达绿色荧光蛋白;经流式细胞仪分选后,U937-GFP和U937-p62细胞中GFP阳性表达率分别达98.5%和87.3%。Western blot的结果显示U937-p62细胞中p62蛋白表达较U937-GFP显著升高。MTT实验结果显示,与U937-GFP细胞相比,U937-p62细胞的生长速率加快。流式结果显示U937-GFP细胞和U937-p62细胞表达细胞表面分化抗原CD11b及CD14无明显差异。【结论】成功构建了p62基因过表达的U937稳定细胞株,过表达p62可促进U937细胞增殖,并不能促进U937细胞的分化。

• 单位
  中山大学附属第三医院