L1.LtrB内含子编码蛋白反转录结构域关键催化位点分析及功能验证

作者：陈相好; 张峥嵘; 刘芳; 陈峥宏; 洪伟; 綦廷娜; 谷俊莹^*; 崔古贞^*

来源：微生物学报, 2019, 59(12): 2357-2366.

DOI：10.13343/j.cnki.wsxb.20190048

• Ll.LtrB
• Ⅱ型内含子
• 内含子编码蛋白
• 反转录
• Targetron

【目的】筛选影响Ll.LtrB内含子编码蛋白(Intron encoded protein,IEP)反转录功能的关键催化位点,并获得无反转录活性的IEP突变体。【方法】首先,利用NCBI数据库,通过序列比对及同源建模方法筛选影响IEP反转录功能的关键氨基酸催化位点;然后,对筛选获得的关键催化位点进行定点突变,同时以Targetron载体为模板,构建无反转录功能的突变型Targetron打靶系统;最后,以大肠杆菌lacZ基因为例,体内验证IEP突变体的功能及其对Ⅱ型内含子"归巢"效率的影响。【结果】筛选到C164和G214两个位点是影响内含子编码蛋白反转录功能的关键氨基酸残基,并获得C164K和G214W两个突变体。体内功能分析表明,此两个位点突变完全失活了Ⅱ型内含子的"归巢"功能。【结论】筛选并获得了失活反转录功能的Ll.LtrB内含子编码蛋白突变体,为深入研究Ⅱ型内含子的结构和"归巢"机理奠定了基础。

• 单位
  基础医学院; 贵州医科大学