红细胞血液制品中红细胞微粒检测方法的建立

作者：张宁洁; 卜艳红; 王勇军

来源：中国输血杂志, 2015, 28(10): 1218-1221.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2015.10.010

• 红细胞微粒
• 超滤离心管
• 流式细胞术
• 输血

目的建立1种准确、稳定的红细胞制品中红细胞微粒(RMPs)的分离检测方法。方法首先以低速离心(3 000 g、20 min)分离得到红细胞悬液上清,再通过提高离心力(10 000 g、10 min)去除红细胞碎片等杂质,获得富含RMPs的红细胞上清,设置超滤离心管使用组和未使用组,分别从上清中分离获得RMPs。对RMPs表面特异抗原CD235a和Annexin V做荧光双染标记,进行流式细胞术检测,将CD235a-PE+/Annexin V-FITC+信号判定为RMPs,分析2组RMPs的纯度和数量差异。选择RMPs得率较高组实验方法,进一步检测储存5、9及30 d的RMPs数量。结果在首次3 000 g离心20 min,第2次10 000 g离心10 min的离心条件下,可从去白悬浮红细胞制品中分离获得富含RMPs的上清,相比于未使用超滤离心管组(1.91±0.51)%,超滤离心管使用组RMPs的获得率(48.91±4.37)%(P<0.01);储存5、30 d的RMPs相对数量分别为(44.67±6.13)%、(75.92±5.51)%(P<0.05)。结论 "二次离心"方法和超滤离心管结合应用,可明显提高RMPs的获得率;红细胞在储存条件下可产生大量RMPs,RMPs数量随着储存时间的增加而增加。

• 单位
  中南大学湘雅二医院