基于RNA复制子GHRH基因表达载体的构建及在293细胞中的表达

作者：任晓慧; 乔继光; 刘松财; 张明军; 章倩倩; 侯峰; 吕铁钢; 周立光; 吴琼; 欧阳松应; 张永亮

来源：畜牧兽医学报, 2007, 395-399.

• 生长激素释放激素
• 塞姆利基森林病毒
• 复制子

本研究将GHRH基因克隆到塞姆利基森林病毒(SFV)复制子质粒型表达载体pCMV-Rep-lacZ,构建了真核表达载体pCMV-Rep-GHRH。采用脂质体介导将表达质粒pCMV-Rep-GHRH转染293细胞,经RT-PCR、IFA、Tricine-SDS-PAGE和Western Blot检测,证明表达质粒pCMV-Rep-GHRH在293细胞中正确地表达了GH-RH多肽分子。本研究还利用放免法检测质粒载体转染细胞培养上清中GHRH浓度,初步比较了RNA复制子载体pCMV-Rep-GHRH和普通载体(pIRES-GHRH和pcDNA3-GHRH)的表达效率,结果表明,转染48 h,RNA复制子载体表达GHRH的含量显著高于普通载体,分别比pIRES-GHRH和pcDNA3-GHRH高出36.12%(P<0.05)和67.94%(P<0.05)。结论:构建的真核表达载体pCMV-Rep-GHRH能够在真核细胞293中表达GHRH多肽分子,且表达水平显著高于普通载体,为下一步更好地调控动物生长以提高动物生产性能奠定基础。

• 单位
  华南农业大学; 吉林大学; 河北农业大学; 北京协和医学院; 中国医学科学院北京协和医院