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摘要
目的探讨子痫前期孕妇的胎盘组织中微小RNA-106b(miR-106b)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达及miR-106b靶向调控MMP-2的表达对滋养细胞侵袭和增殖的影响。方法共纳入30例轻度子痫前期(mPE)、30例重度子痫前期(sPE)和40例正常孕妇, 分别为mPE组、sPE组及对照组, 收集其胎盘组织;将绒毛膜癌细胞系JAR细胞和JEG3细胞各分为4组(miR-106b模拟物组、模拟物对照组、miR-106b抑制物组、抑制物对照组)。采用荧光素酶报告基因活性检测法验证miR-106b对其靶基因MMP-2基因表达的调控作用;采用实时荧光定量PCR技术、蛋白印迹法检测3组孕妇的胎盘组织和各组细胞中miR-106b和MMP-2 mRNA、蛋白的表达水平;并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞的相对增殖率, 采用体外侵袭实验检测各组细胞的侵袭力。结果 (1)荧光素酶报告基因活性检测法显示, 含miR-106b的质粒和含MMP-2基因的重组质粒共同转染JAR细胞和JEG3细胞后, 与模拟物对照比较, 其荧光素酶水平下降(P<0.01)。(2)实时荧光定量PCR技术显示:①mPE组、sPE组及对照组孕妇的胎盘组织中, miR-106b和MMP-2 mRNA的表达水平分别为2.89±0.04、1.96±0.03、1.01±0.03, 1.87±0.05、0.69±0.03、2.78±0.03, 3组分别比较, 差异均有统计学意义(P<0.05)。② 4组JAR细胞和4组JEG3细胞(miR-106b模拟物组、模拟物对照组、miR-106b抑制物、抑制物对照组)的miR-106b的表达水平分别为2.39±0.03、1.03±0.04、0.73±0.03、1.11±0.04, 2.17±0.04、1.18±0.04、0.61±0.03、1.22±0.03, JAR、JEG3细胞4组间分别比较, 差异有统计学意义(P<0.05)。③4组JAR细胞和4组JEG3细胞的MMP-2 mRNA的表达水平分别为0.45±0.15、1.02±0.03、2.28±0.03、1.11±0.03, 0.58±0.03、1.25±0.15、2.25±0.03、1.21±0.03, JAR、JEG3细胞的4组间分别比较, 差异有统计学意义(P<0.05)。(3)蛋白印迹法显示:①3组孕妇胎盘组织中MMP-2蛋白的表达水平分别为1.63±0.04、0.55±0.03、2.82±0.03, 3组比较, 差异有统计学意义(P<0.05)。②4组JAR细胞的MMP-2蛋白表达水平分别为0.41±0.03、0.97±0.03、2.25±0.03、1.01±0.03, 4组比较, 差异有统计学意义(P<0.05)。③4组JEG3细胞的MMP-2蛋白表达水平分别为0.53±0.03、1.20±0.03、2.31±0.04、1.19±0.03, 差异有统计学意义(P<0.05)。(4)MTT法检测显示:JAR细胞和JEG3细胞经miR-106b模拟物转染后(即miR-106b模拟物组)细胞增殖率均明显低于相应模拟物对照组, 差异有统计学意义(P均<0.05);经miR-106b抑制物转染后(即miR-106b抑制物组)细胞增殖率均明显高于相应的抑制物对照组, 差异有统计学意义(P均<0.05)。(5)体外侵袭实验显示:①4组JAR细胞的穿膜细胞数分别为(61±15)、(79±13)、(134±13)、(80±12)个, 差异有统计学意义(P<0.05);②4组JEG3细胞的穿膜细胞数分别为(57±12)、(71±15)、(128±15)、(70±14)个, 差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-106b能够通过靶向调控MMP-2的表达抑制JAR细胞和JEG3细胞的侵袭、增殖, 与子痫前期的发病相关。
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