人纤溶酶原K5突变体在大肠杆菌中的优化表达

作者：李朝阳; 温南; 杨中汉; 蔡卫斌; 李明友; 刘祖国; 高国全; 杨霞

来源：中山大学学报(医学科学版), 2008, (02): 221-225.

DOI：10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2008.0059

• 人纤溶酶原K5
• 缺失突变体
• 血管新生
• 优化表达 human plasminogen kringle5
• deletion mutant
• neovascularization
• optimal expression

【目的】提高K5突变体(mK5)在原核系统的单位表达量。【方法】调整可能影响表达的参数:抗生素浓度、pH、A600值、IPTG终浓度、诱导时间、诱导温度,同时固定其它参数。通过电泳分析,获得mK5在原核系统pET22b-BL21的最优表达条件;组氨酸结合柱亲和层析、纯化获得mK5蛋白,SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定mK5蛋白;MTT法分析mK5对人视网膜毛细血管内皮细胞(HRCEC)增殖的影响。【结果】优化后的表达条件为:最适细菌培养温度为37℃,最佳抗生素浓度为50μg/mL羧苄青霉素,最适pH值为7.0,在A600为0.9～1.0时加入终浓度为1.0mmol/L的IPT...

• 单位
  中山大学中山医学院; 生物化学教研室; 中山大学中山眼科中心; 眼科学国家重点实验室