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摘要
目的 探究外泌体miR-20a-5p对非小细胞肺癌（NSCLC）骨转移的调控作用及机制。方法 提取并鉴定16HBE、A549、PC9、H1299细胞以及转染miR-20a-5p mimic和miR-NC的A549细胞所分泌的外泌体。qRT-PCR检测各种细胞及外泌体中miR-20a-5p的表达。将A549和RAW264.7细胞分为PBS组、16HBE exo组、A549 exo组、miR-NC exo组和miR-20a-5p exo组。Transwell小室检测A549细胞迁移和侵袭能力，TRAP染色检测破骨细胞分化。Western blot检测各组RAW264.7细胞Sp1和CD147的表达。6周龄的雌性Balb/c裸鼠随机分为5组，分别注射PBS(A组)、16HBE exo(B组)、A549 exo(C组)、miR-NC exo(D组)和miR-20a-5p exo(E组)外泌体4周，构建NSCLC骨转移的小鼠模型；HE染色观察各组小鼠骨转移情况。结果 透射电镜下观察到A549 exo、PC9 exo、H1299 exo、16HBE exo为具有双层膜的囊泡样结构，粒径在30～100 nm，且均表达CD9、CD81、HSP70标志蛋白。miR-20a-5p高表达于NSCLC细胞及其外泌体。与PBS组相比，A549 exo组肿瘤细胞迁移和侵袭能力显著增加（P<0.001）,RAW264.7细胞中miR-20a-5p表达上调（P<0.001），破骨细胞分化显著增加（P<0.001）,Sp1和CD147表达显著增加（P<0.001）。与miR-NC exo组相比，miR-20a-5p exo组A549细胞迁移和侵袭能力增加（P<0.001）,RAW264.7细胞中miR-20a-5p表达上调（P<0.001），破骨细胞分化显著增加（P<0.001）,Sp1和CD147表达显著增加（P<0.001）。在小鼠体内实验中，A组、B组骨组织骨小梁结构完整，组织中有少量肿瘤细胞，骨髓腔相对完整，病变较少；C组小鼠骨组织出现大量肿瘤细胞且细胞紧密排列，骨小梁显著破坏，核浆比例严重失调，病变显著增加；E组小鼠骨组织中出现大量肿瘤细胞，骨小梁破坏严重，病变较D组显著。结论 外泌体miR-20a-5p可显著促进NSCLC的体内外转移，其机制可能为激活破骨细胞Sp1/CD147信号通路从而促进破骨细胞的分化。
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