小鼠STAT4,STAT6基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

作者：杨琴; 符州; 田代印; 刘恩梅; 王莉佳; 黄英

来源：重庆医科大学学报, 2009, 34(01): 16-19.

• 哮喘
• 信号传导子及转录激活因子
• RNA干扰
• shRNA
• 质粒

目的:构建并鉴定小鼠信号转导子和转录激活因子4(STAT4),信号转导子和转录激活因子6(STAT6)具有发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒。方法:根据STAT4和STAT6基因mRNA序列,在体外分别合成有小发夹结构的2条STAT4特异性寡核苷酸序列,2条STAT6特异性寡核苷酸序列,退火后与线性化pGenesil-3质粒连接,转化感受态细胞DH5α,扩增,纯化得到所需质粒。同时设计构建分别针对小鼠甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)的干扰质粒作为阳性对照,不具有基因同源性的非特异性基因的质粒作为阴性对照序列。通过酶切后琼脂糖凝胶电泳和基因测鉴定纯化质粒分子量及插入片段的序列。结果:经限制性酶切和测序鉴定分析证实基因插入正确,与设计的序列完全相符。结论:成功构建了针对小鼠STAT4,STAT6基因的发夹结构小干扰RNA表达载体。为今后利用基因沉默技术从转录后水平抑制STAT4,STAT6的研究奠定基础。

• 单位
  重庆医科大学附属儿童医院