科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的 BH3-only蛋白是Bcl-2家族的促凋亡成员,可与抗凋亡成员结合启动肿瘤细胞凋亡和自噬。BH3拟似药通过模拟BH3-only蛋白促进肿瘤细胞凋亡和自噬,是肿瘤治疗中最具前景的药物之一。因此我们的研究目的是寻找新的BH3拟似药并阐明其抗肿瘤作用机制,为发展新的BH3拟似药奠定基础。方法通过基于药效团模型的虚拟筛选技术和分子对接筛选出潜在的BH3拟似化合物。用MTS实验检测筛选出来的化合物对多种肿瘤细胞的抑制率。采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测化合物对细胞凋亡的影响,免疫共沉淀(Co-IP)检测化合物对Bcl-2/Beclin-1复合物的影响。共聚焦显微镜检测化合物对肿瘤细胞自噬的影响,采用Western印迹法检测凋亡和自噬相关蛋白的表达。通过hoechst 33342染色、透射电镜、MDC染色检测AD23联合伏立诺他对肿瘤细胞蛋白与自噬的影响,动物实验检测AD23联合伏立诺他的抗肿瘤效果。结果筛选出BH3拟似化合物AD23。分子对接和表面等离子共振实验结果表明,AD23可与Bcl-2,MCL-1和Bcl-XL蛋白结合,通过MTS实验发现AD23抑制小细胞肺癌细胞系作用最强。Annexin V/PI双染实验结果显示,AD23可以浓度依赖性的促进H82细胞凋亡。Western印迹实验结果显示,AD23可以剂量依赖性诱导胱天蛋白酶3活化,诱导C-PARP蛋白增多从而激活凋亡通路。mCherry-GFP-LC3质粒转染结果显示,AD23可以浓度依赖性的促进自噬流过程的发生。Co-IP实验结果表明,AD23可时间依赖性促进Bcl-2与Beclin-1解离,AD23可以浓度依赖性的上调LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白比例增加,下调P62蛋白的表达,从而激活自噬通路。细胞及动物实验结果表明AD23联合伏立诺他给药组促进H82细胞凋亡与自噬较单独给药组明显增加。结论 BH3天然拟似化合物AD23可促进小细胞肺癌细胞凋亡与自噬,AD23与伏立诺他具有协同抗肿瘤作用。
-
单位石河子大学; 基础医学院
