下调circ＿USP36靶向miR-326对高糖诱导的RPE细胞损伤的影响

作者：梁明明^*; 冯冰

来源：中国中医眼科杂志, 2022, 32(12): 939-944.

DOI：10.13444/j.cnki.zgzyykzz.2022.12.004

• 环状核糖核酸泛素特异性肽酶36
• 微小核糖核酸-326
• 高糖
• 视网膜色素上皮细胞
• 氧化应激

目的 探讨环状核糖核酸泛素特异性肽酶36(circ＿USP36)靶向微小核糖核酸-326(miR-326)对高糖诱导的视网膜色素上皮(RPE)细胞损伤的影响。方法 RPE细胞ARPE-19根据高糖、circ＿USP36干扰表达载体(si-circ＿USP36)、miR-326抑制剂(anti-miR-326)、阴性对照(NC)等处理方法的不同，分为8个组：对照组(CG)、高糖组(HG)、si-circ＿USP36组、si-NC组、miR-326组、miR-NC组、si-circ＿USP36+anti-miR-326组、si-circ＿USP36+anti-miR-NC组，培养细胞24 h。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ＿USP36和miR-326的表达水平；流式细胞术检测细胞凋亡情况；酶联免疫吸附法(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平；双荧光素酶报告实验检测circ＿USP36和miR-326的靶向关系。结果 (1)下调circ＿USP36对高糖作用的ARPE-19细胞凋亡、氧化应激的影响：与CG组比较，HG组circ＿USP36、凋亡率和MDA水平升高(tcirc＿USP36=53.199,t凋亡率=21.092,tMDA=22.867，均P=0.000),miR-326和SOD水平降低(tmiR-326=65.818,tSOD=15.362，均P=0.000)；与HG组和si-NC组比较，si-circ＿USP36组circ＿USP36(tHG=14.241,tsi-NC=13.967，均P=0.000)、凋亡率(tHG=29.919,tsi-NC=22.849，均P=0.000)和MDA(tHG=14.174,tsi-NC=14.878，均P=0.000)水平降低，而miR-326(tHG=14.241,tsi-NC=13.967，均P=0.000)和SOD(tHG=12.571,tsi-NC=12.133，均P=0.000)水平升高，差异均有统计学意义。(2)circ＿USP36和miR-326靶向关系验证：过表达miR-326降低circ＿USP36的野生型荧光素酶载体(WT-circ＿USP36)的荧光素酶活性(t=11.232,P=0.000)，差异有统计学意义，而对突变型荧光素酶载体(MUT-circ＿USP36)荧光素酶活性的影响无统计学意义(P>0.05)。(3)miR-326对高糖作用的ARPE-19凋亡和氧化应激的影响：与miR-NC组相比，miR-326组的miR-326和SOD水平升高(tmiR-326=41.254,P=0.000;tSOD=8.413,P=0.001)，细胞凋亡率和MDA水平降低(t凋亡率=17.547,tMDA=15.209，均P=0.000)，差异均有统计学意义。(4)抑制miR-326对下调circ＿USP36处理的高糖作用的ARPE-19凋亡、氧化应激的影响：与si-circ＿USP36+anti-miR-NC组相比，si-circ＿USP36+anti-miR-326组的miR-326和SOD水平降低(tmiR-326=33.486,tSOD=9.145，均P=0.000)，而细胞凋亡率和MDA水平升高(t凋亡率=9.096,P=0.001;tMDA=12.360,P=0.000)，差异均有统计学意义。结论 下调circ＿USP36可通过靶向调控miR-326减缓高糖诱导的RPE细胞凋亡和氧化损伤。

• 单位
  东南大学附属中大医院