重组人凝血因子Ⅶ在HEK293细胞中的瞬时表达

作者：张全爱; 赵峰梅; 曹鹏程; 潘薇薇; 赵亚蕊; 王伟霞; 赵邑^*

来源：山西科技, 2020, 35(02): 17-21.

• 人凝血因子Ⅶ
• γ-谷氨酰基羧化酶
• 维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1

[目的]在HEK293细胞中表达人凝血因子Ⅶ(human coagulation factor,hFⅦ)蛋白。[方法]通过PCR分别扩增与hFⅦ羧基化有关的酶(γ-谷氨酰基羧化酶(GGCX)和维生素K环氧化物还原酶复合体亚单位1(VKORC1))基因序列,与hFⅦ基因片段构建真核表达载体p CAEVKORC1-GGCX-hFⅦ,利用脂质体将表达载体转入HEK293细胞,采用Western blotting和ELISA方法检测细胞上清中hFⅦ的表达水平,凝血因子Ⅶ检测试剂盒测定hFⅦ的促凝血活性。[结果]Western blotting检测细胞上清中含有hFⅦ蛋白,经ELISA检测表达量为12 mg/L,凝血因子Ⅶ检测试剂盒测定hFⅦ的促凝血相对比活性为612%。[结论]该表达载体成功在HEK293细胞中瞬时表达hFⅦ蛋白,为进一步深入研究hFⅦ的生物学特性奠定了基础。