黑鲷×真鲷杂交子代与真鲷的Calmodulin基因克隆与表达分析

作者：陈淑吟; 张志勇; 吉红九; 李鹏; 赵永超; 张志伟

来源：海洋渔业, 2018, 40(4): 435-446.

DOI：10.3969/j.issn.1004-2490.2018.04.006

• 黑鲷×真鲷杂交子代
• 钙调蛋白
• 基因克隆
• mRNA表达

采用cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得的黑鲷(Acanthopagrus schlegelii,♂)×真鲷(Pagrus major,♀)的杂交子代F1(AP)与真鲷(Pm)的两组Calmodulin(CaM)基因序列.通过生物软件分析了两者的差异及所表达的蛋白质特性;同时,应用实时荧光定量PCR技术检测了APCaM与PmCaM在仔鱼及2龄鱼的6种不同组织中的表达特征.结果表明:1)克隆得到APCaM与PmCaM的eDNA全长分别为1 230 bp、1 210bp,两基因序列均具有一个450 bp的开放阅读框(Open reading frame,ORF),编码了一个由149个氨基酸组成的多肽,该多肽包含有高度保守的4个EF-hand功能结构域.杂交F1与真鲷的CaM基因非翻译区差异位点主要在3'端,ORF区域有5个氨基酸差异.2)两基因与其它鱼类的核苷酸序列相似性最高为95％,与氨基酸序列相似性最高为100％;从基因序列结构及蛋白质属性表明APCaM与PmCaM属保守的CaM基因家族.3)定量分析表明CaM在检测组织中均有表达,其中APCaM在脑中表达量最高,PmCaM在性腺中表达最高;APCaM与PmCaM在脑、肌肉、性腺及鳃中的表达存在显著差异(P＜0.01),在肝、肾组织及仔鱼中的表达无显著差异(P＞0.05);结合杂交F1与双亲本在生长及性腺发育上的性状,推测CaM可能与生长及性腺发育调控有关.这些结果为探讨CaM基因在杂交F1及真鲷亲本中的作用及鲷科育种研究提供基础资料.

• 单位
  南京师范大学; 生命科学学院; 江苏省海洋水产研究所