牙髓卟啉单胞菌内毒素对成骨细胞分化的抑制作用

作者：王瑞; 杨谛^*; 于雅琼; 郭佳杰; 仇丽鸿

来源：上海口腔医学, 2021, 30(04): 350-354.

DOI：10.19439/j.sjos.2021.04.003

• 牙髓卟啉单胞菌
• 脂多糖
• Toll样受体4
• 成骨分化

目的 :研究牙髓卟啉单胞菌脂多糖(P.e-LPS)对成骨细胞分化的影响,探讨P.e-LPS在根尖周骨吸收疾病中的致病机制。方法:厌氧条件下培养P.e,应用热酚水法提取P.e-LPS,采用凝胶鲎试剂法对所提取的LPS进行定性分析。应用成骨细胞分化培养基(50μg/mL抗坏血酸、6 mmol/Lβ甘油磷酸钠)诱导前成骨细胞系MC3T3-E1向成骨细胞分化。实时定量PCR(RT-PCR)检测成骨分化基因Distal-less homeobox 5(DLX5)、Runt-related transcription factor2(Runx2)、Osterix、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)以及胶原(Collagen)的表达。碱性磷酸酶(ALP)活性测定、茜素红染色以及Von Kossa染色检测成骨细胞的矿化水平。应用siRNA转染,沉默P.e-LPS的受体Toll-like receptor-4(TLR-4)在成骨细胞中的表达。采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析。结果 :P.e-LPS(10μg/mL)作用于MC3T3-E1细胞3 d,与对照组相比,成骨分化基因DLX5、Runx2、Osterix、OCN、BSP、胶原的mRNA表达水平显著下降(P<0.05)。P.e-LPS(10μg/mL)分别作用于MC3T3-E1细胞7 d和14 d,ALP活性及茜素红染色强度下降。P.e-LPS分别作用于siRNA-TLR-4转染组及对照组7、14、21 d,与对照组相比,si-TLR-4组细胞的成骨分化基因表达水平、ALP活性、茜素红染色强度以及Von Kossa染色强度均显著高于对照组(P<0.05)。结论:P.e-LPS通过受体TLR-4抑制成骨细胞的分化,从而参与根尖周病变的骨吸收过程。

• 单位
  中心实验室; 中国医科大学